Dati tecnici
Istruzioni per l'uso di colonne/piastre per la dissalazione c18
Introduzione al prodotto
Le colonne/piastre di desalinizzazione C18 sono riempite con una matrice di gel di silice C18, il cui gruppo funzionale, l'ottadecile, presenta un'elevata idrofobicità ed eccellenti proprietà di ritenzione per composti non polari. Le colonne/piastre di desalinizzazione C18 possono adsorbire molecole di primer/oligonucleotidi/DNA con DMT senza ritenzione salina, ottenendo prodotti di primer/oligonucleotidi/DNA ad elevata purezza.
Guida alla selezione
BM Life Sciences offre colonne/piastre di desalinizzazione C18 in diverse dimensioni, ed è possibile scegliere la colonna di desalinizzazione più adatta in base alla concentrazione di primer/oligo. Per l'elaborazione in batch, è possibile scegliere una piastra di desalinizzazione a 96 pozzetti.
| Numero di prodotto | norma | Specifiche degli oligonucleotidi applicabili | Fasi di riferimento |
| SPEC18W150 | 50 mg/1 ml | 10nmol - 200nmol | Fase 5 |
| SPEC18W3100 | 100 mg/3 ml | 10nmol - 600nmol | Passo 1 |
| SPEC18W3300 | 300 mg/3 ml | 10nmol - 2 .opmol | Passo 2 |
| SPEC18W61000 | 1 g/6 ml | 1 umol - 6 umol | Fase 3 |
| SPEC18W9630 | Piastra da 30 mg/96 pozzetti | 5nmol - 100nmol | Fase 4 |
| SPEC18W9650 | Piastra da 50 mg/96 pozzetti | 10nmol - 200nmol | Fase 4 |
| SPE15C18W9680 | Piastra da 80 mg/96 pozzetti (piastra da 1,5 ml a 96 pozzetti) | 10nmol - 500nmol | Fase 5 |
| SPE23C18W9680 | Piastra da 80 mg/96 pozzetti (piastra da 2,3 ml a 96 pozzetti) | 10nmol - 500nmol | Fase 5 |
Nota
La colonna/piastra di pulizia C18 può anche desalinizzare il prodotto grezzo e il primer/oligo dopo la purificazione HPLC e PAGE, vedere il passaggio 5 per i dettagli.
Reagente
Grado cromatografico di acetonitrile
0,1 M TEA, pH 7,0
0,5 M NaCl
Soluzione di lavaggio (acetonitrile al 5% disciolto in Nacl 0,5 M)
acido trifluoroacetico (TFA) al 3%
Acqua deionizzata
acetonitrile al 20%
Tampone TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, pH 8,0
Passo 1
Preparazione del campione
Aggiungere 0,5 M NacI al campione di oligonucleotidi fino a un volume di 2 mL.
Attivazione della colonna di dissalazione
Attivazione: per attivare la colonna è stato utilizzato 1 mL di acetonitrile.
Equilibratura: bilanciare la colonna con 1 mL di soluzione TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Processo di pulizia
1. Far passare 2 mL di soluzione contenente oligonucleotidi attraverso una colonna di desalinizzazione.
2. Sciacquare la colonna 2 volte con 1 mL di soluzione di lavaggio per rimuovere le sequenze non riuscite.
3. Sciacquare la colonna 2 volte con 1 ml di acqua deionizzata per rimuovere i sali.
4. Sciacquare la colonna 2 volte con 1 ml di acido trifluoroacetico al 3% per rimuovere il DMT e osservare che lo strato adsorbito diventa rosso-arancio; e
5. Sciacquare due volte la colonna di desalinizzazione con 1 mL di acqua deionizzata per rimuovere l'acido trifluoroacetico e i sali residui.
6. Eluire 1 ml di acetonitrile al 20% e assemblare.
Passo 2
Preparazione del campione
Aggiungere 0,5 M NacI al campione di oligonucleotidi fino a un volume di 4 mL.
Attivazione della colonna di dissalazione
Attivazione: per attivare la colonna sono stati utilizzati 2 mL di acetonitrile.
Equilibratura: bilanciare una colonna da 2 mL con TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Processo di pulizia
1. Far passare 4 mL di soluzione contenente oligonucleotidi attraverso una colonna di desalinizzazione.
2. Sciacquare la colonna 2 volte con 2 ml di soluzione di lavaggio per rimuovere le sequenze non riuscite.
3. Sciacquare la colonna 2 volte con 2 ml di acqua deionizzata per rimuovere i sali ;)
4. Sciacquare la colonna 2 volte con 2 ml di acido trifluoroacetico al 3% per rimuovere il DMT, lo strato di adsorbimento è diventato rosso-arancio.
5. Sciacquare la colonna con acqua demineralizzata due volte con 2 mL di acqua deionizzata per rimuovere l'acido trifluoroacetico e i sali residui.
6. Eluire 2 ml di acetonitrile al 20% e assemblare.
Fase 3
Preparazione del campione
Aggiungere 0,5 M Nac al campione di oligonucleotidi fino a un volume di 10 mL.
Attivazione della colonna di dissalazione
Attivazione: per attivare la colonna sono stati utilizzati 5 mL di acetonitrile.
Equilibratura: la colonna è stata bilanciata con 10 mL di TEAA 0,1 m (PH 7,0).
Processo di pulizia
1. 10 mL di soluzione contenente oligonucleotidi sono stati fatti passare attraverso una colonna di desalinizzazione.
2. La colonna è stata lavata due volte con 5 mL di soluzione di lavaggio per rimuovere le sequenze non riuscite.
3. Sciacquare la colonna due volte con 5 mL di acqua deionizzata per rimuovere i sali.
4. Lavare la colonna due volte con 5 mL di acido trifluoroacetico al 3% per rimuovere il DMT e notare che lo strato di adsorbimento è diventato rosso-arancio.
5. Sciacquare la colonna due volte con 5 ml di acqua deionizzata per rimuovere l'acido trifluoroacetico e i residui di sale.
6. Eluire 5 ml di acetonitrile al 20% e raccogliere.
Fase 4
Preparazione del campione
Aggiungere 0,5 M di Nacl al campione di oligonucleotidi fino a un volume di 0,5 mL.
Attivazione della piastra a 96 pozzetti
Attivazione: 0,5 mL di acetonitrile sono stati fatti passare attraverso ciascun pozzetto di una piastra da 96 pozzetti.
Equilibrio: equilibrare una piastra a 96 pozzetti con 0,5 mL di soluzione TEAA 0,1 M (pH 7,0).
Procedura di pulizia
1. Passare 0,5 mL di soluzione contenente oligonucleotidi attraverso una piastra a 96 pozzetti.
2. Sciacquare la piastra a 96 pozzetti 2 volte con 0,5 mL di soluzione di lavaggio per rimuovere le sequenze errate.
3. Sciacquare la piastra a 96 pozzetti 2 volte con 0,5 mL di acqua deionizzata per rimuovere i sali.
4. Lavare la piastra a 96 pozzetti 2 volte con 0,5 ml di acido trifluoroacetico al 3% per rimuovere il DMT e osservare che lo strato di adsorbimento diventa rosso-arancio; e
5. Sciacquare due volte la piastra a 96 pozzetti con 0,5 mL di acqua deionizzata per rimuovere l'acido trifluoroacetico e i residui di sale.
6. Eluire 0,5 ml di acetonitrile al 20% e raccogliere il materiale.
Fase 5
Preparazione del campione
Aggiungere 0,5 M Nacl al campione di oligonucleotidi fino a un volume di 1,2/2 mL.
Attivazione della piastra a 96 pozzetti
Attivazione: far passare 1-4 ml (0,5 mL) di acetonitrile attraverso ogni pozzetto di una piastra da 96 pozzetti.
Equilibratura: bilanciare una piastra a 96 pozzetti con 1-4 mL di 0,5 mL di soluzione di TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Processo di pulizia
1. Far passare 0,5-2 mL di soluzione contenente oligonucleotidi attraverso una piastra a 96 pozzetti.
2. Sciacquare la piastra a 96 pozzetti 2 volte con 1/2 mL di soluzione di lavaggio per rimuovere le sequenze indesiderate ;)
3. Sciacquare due volte la piastra a 96 pozzetti con 1/2 mL di acqua deionizzata per rimuovere i sali.
4. Lavare 2 volte la piastra a 96 pozzetti con 1/2 ml di acido trifluoroacetico al 3% per rimuovere il DMT e osservare che lo strato di adsorbimento diventa rosso-arancio;
5. Sciacquare la piastra a 96 pozzetti con 1/2 mL di acqua deionizzata 2 volte per rimuovere l'acido trifluoroacetico e i residui di sale.
6. Eluire 1/2 ml di acetonitrile al 20% e raccogliere il materiale.
Fase 6
Reagente
Grado cromatografico di acetonitrile
0,05 M TÈ, pH 7,0
2 M TÈ, PH 7.0
Acqua deionizzata (per la desalinizzazione e la purificazione delle molecole di RNA senza RNasi) 60% acetonitrile (sciolto in acqua contenente lo 0,5% di NH4OH)
20% di acetonitrile (per desalinizzare le molecole di DNA o RNA dopo la deprotezione)
Tampone TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, pH 8,0
Preparazione del campione
Oligo purificato tramite HPLC: aggiungere una quantità adeguata di TEAA 0,1 M agli oligo purificati tramite HPLC in modo che la concentrazione finale di acetonitrile sia ≤5%. Oligo purificati: sciogliere i frammenti di gel contenenti oligonucleotidi in TEAA 0,05 M, rimuovere i frammenti di gel, sciogliere l'oligo in almeno 2 mL di TEAA 0,1 M.
Oligo disciolti in NH4OH o AMA: evaporare fino a secchezza e sciogliere in 2 mL di TEAA 0,1 M.
Attivazione della pompa di desalinizzazione
Attivazione: per attivare la colonna è stato utilizzato 1 mL di acetonitrile.
Equilibratura: bilanciare una colonna TEAA 2 M da 1 mL (pH 7,0).
Procedura di desalinizzazione degli oligo per la purificazione HPLC
1. Far passare la soluzione contenente gli oligonucleotidi attraverso la colonna di desalinizzazione.
2. Sciacquare due volte la colonna di desalinizzazione con 1 ml di acqua deionizzata per rimuovere i sali.
3. Eluire attraverso una colonna di 1 ml di acetonitrile al 60% e raccogliere.
Procedura di desalinizzazione degli oligospurghi purificata con il metodo PAAG
1. Far passare la soluzione contenente gli oligonucleotidi attraverso la colonna di desalinizzazione.
2. Sciacquare due volte la colonna di desalinizzazione con 1 ml di acqua deionizzata per rimuovere i sali.
3. Eluire attraverso una colonna di 1 ml di acetonitrile al 60% e raccogliere.
Procedura per la desalinatura degli oligoni del DNA dopo la sintesi
1. Far passare la soluzione contenente gli oligonucleotidi attraverso la colonna di desalinizzazione; e
2. Sciacquare due volte la colonna TEAA da 1 mL 0,1 M per rimuovere le sequenze non riuscite.
3. Sciacquare due volte la colonna di desalinizzazione con 1 ml di acqua deionizzata per rimuovere i sali.
4. Far passare la colonna attraverso 1 ml di acetonitrile al 20% e assemblare.
Procedura di desalinizzazione degli oligo di RNA dopo la sintesi
1. Far passare la soluzione contenente gli oligonucleotidi attraverso la colonna di desalinizzazione.
2. Sciacquare la colonna con 2 ml di TEAA 0,1 M.
3. Sciacquare la colonna con 2 mL di acqua priva di RNasi.
4. Far passare 2 ml di acetonitrile al 20% (acqua priva di RNasi) attraverso una colonna, eluire e raccogliere. Conservazione degli oligonucleotidi
Gli oligonucleotidi disciolti in acetonitrile al 20% e conservati a 4°C impediscono la crescita di microrganismi e sono adatti alla conservazione a breve termine.
Gli oligonucleotidi in una soluzione di acetonitrile al 20% (o disciolti in un tampone alcalino come TE) possono essere conservati per lungo tempo a temperature fino a -20 °C.
Gli oligonucleotidi sotto forma di polvere liofilizzata possono essere conservati a lungo.
Avvertimento
Le quantità dei reagenti utilizzati sono solo raccomandazioni e devono essere ottimizzate in ogni caso specifico.
Le quantità dei reagenti utilizzati sono solo raccomandazioni e devono essere ottimizzate caso per caso.
La colonna di desalinizzazione deve raggiungere un equilibrio di attivazione sufficiente a eluire i residui presenti sulla colonna/piastra e a migliorarne la capacità di legame. Il campionamento degli oligonucleotidi sintetizzati deve essere eseguito lentamente per evitare che la polvere di CPG penetri nella colonna/piastra durante la pulizia e la contaminazione incrociata.
Le colonne/wafer di desalinizzazione C18 utilizzano una matrice di silice, l'intervallo di pH applicabile è 2-7, un pH > 7,5 dissolve facilmente la matrice di silice, un pH
Quando si utilizza il TFA per la desalinizzazione del DMT, bisogna fare attenzione al tempo: troppo tempo avrà l'effetto di rimuovere la purina.
Essere attaccato
Colonne di sintesi CPG Frits B&M Universal Tecnologia di desalinizzazione e purificazione rapida
Colonne di sintesi B&M Universal CPG Frits Tecnologia di desalinizzazione e purificazione rapida:
Le fritte CPG universali B&M sono realizzate in polietilene ultrapuro importato ad altissimo peso molecolare e polvere CPG importata, lavorate con una tecnologia speciale, hanno un buon effetto di sintesi nella colonna di sintesi, un basso tasso di mutazione e una qualità del prodotto affidabile.
Una volta completata la sintesi nel sintetizzatore della serie Dr.Oligo/Mermade e sciolta l'ammoniaca, Oligo può essere eluito direttamente nella colonna di sintesi e, dopo il dosaggio e lo svuotamento, può essere utilizzato direttamente per la reazione PCR di routine, senza ulteriori passaggi di purificazione, il che è comodo da usare, consente di risparmiare sui costi e di ottenere una consegna più rapida!
Le fasi specifiche dell'operazione sono le seguenti:
1, colonne/piastre sintetiche Synthesis B&M Universal CPG Frits da 400 ul, miscela di acqua ultrapura al 75% di acetonitrile lavata due volte per rimuovere i reagenti residui sintetici;
2, colonne/piastre per ammolisi di ammoniaca sintetica B&M Universal CPG Frits, 90°C, 80 PSI, ammolisi di ammoniaca 2-2,5 h;
3, colonna/piastra sintetica di lavaggio 400L con acetonitrile al 100%, due volte;
4、Miscela di acqua ultrapura al 90% di acetonitrile 400ul Lavaggio colonna/piastra sintetica, due volte, pompaggio a secco;
5. Volume appropriato di eluente per l'eluizione dei primer sulla colonna/piastra sintetica: l'eluente può essere acqua ultrapura, una miscela di acqua ultrapura di trietilammina al 3% o una miscela di acqua ultrapura di acetonitrile al 20%.
6. La soluzione di eluizione può essere misurata, distribuita, drenata, confezionata e spedita.