Dati tecnici
Istruzioni per l'uso della colonna/piastra di dissalazione Sephadex G-25
Introduzione al prodotto
La colonna/piastra di desalinizzazione Destrano G-25 utilizza principalmente la funzione di setaccio molecolare nei suoi composti polimerici in gel di destrano con una struttura reticolare. A causa delle diverse dimensioni del peso molecolare delle sostanze separate, quando queste attraversano il gel G-25, le sostanze ad alto peso molecolare (come le proteine) vengono bloccate all'esterno delle particelle di gel e fuoriescono attraverso l'intercapedine tra le particelle di gel. Il processo è breve e la velocità di movimento è elevata, quindi le sostanze ad alto peso molecolare fuoriescono per prime dalla colonna/piastra. Le sostanze a basso peso molecolare (ad esempio i sali) possono penetrare nei micropori delle particelle di gel. Il processo è lungo e lento, mentre le sostanze ad alto peso molecolare impiegano più tempo per fuoriuscire dalla colonna/piastra, quindi vengono infine lavate via e quindi separate.
I parametri del supporto Sephadex serie G-25 sono riportati nella tabella
| Progetto | parametrico |
| Caratteristiche | Gel bianco sporco |
| Dimensione media delle particelle (secche) | 150±100μm 92,8 |
| Distribuzione granulometrica delle particelle (45-165μm)% | ≥80 |
| Split Range (portoghese) | 100-5000 |
| Intervallo di separazione (globulina) | 1000-5000 |
| Rapporto acqua (ml colla umida/g polvere secca) | 2.3-2.7 |
| Portata lineare (0,3 MPA, cm/h) | 697.1 |
| Portata massima (cm/h) | 150 |
| Soluzione di conservazione | 0,2 M NaAc 20% di etanolo |
| condizioni di conservazione | 4'C-30'C |
Il numero del modello G indica la quantità di acqua assorbita per grammo di gel, ad esempio il mezzo gel G-25 indica che vengono assorbiti 2,5 ml di acqua per grammo di gel secco, ovvero il coefficiente di espansione del gel, che è anche la dimensione dei pori delle particelle di gel.
I supporti cromatografici della serie Sephadex G-25 sono ampiamente utilizzati per lo scambio di tamponi, la desalinizzazione delle proteine, la separazione di proteine di diverso peso molecolare, ecc. Il volume massimo del campione per la desalinizzazione e il tamponamento può arrivare fino al 30% del volume del letto della colonna.
Flusso di lavoro
1. Bilanciamento dell'altoparlante/tablet: una volta che l'altoparlante/tablet con il Sefadex G-25 precaricato è in posizione verticale, bilanciare la colonna/tablet di desalinizzazione G-25 con un tampone da 5 a 10 volte il volume dello strato della colonna. (Nota: il tampone è il tampone desiderato da sostituire, ad esempio PBS, acqua deionizzata, ecc.; fare attenzione, controllare la portata)
2. Campionamento: dopo aver bilanciato la colonna/piastra di gel con il tampone, pipettare il campione e aggiungerlo lentamente al setaccio sulla superficie del gel, aprire il tappo inferiore e lasciare che il campione penetri lentamente nel gel fino a quando non è a filo con esso. (Nota: il volume del campione sul fondo è solitamente pari al 10-30% del volume dello strato della colonna; la viscosità del campione non deve essere troppo elevata, altrimenti la durata del premistoppa G25 sarà ridotta).
3. Eluizione: il campione viene eluito con un tampone di eluizione dopo essere completamente penetrato nel gel. (Nota: la portata del campione raccomandata è di circa 1-2 ml/min. Il volume di eluizione è solitamente 1,2-2,0 volte il volume del campione).
4. Purificazione e rigenerazione: alcune proteine vengono denaturate in soluzione salina, quindi potrebbe essere necessario purificarle lavando il letto della colonna con 0,2 M di NaOH o un altro detergente non ionico.
5. Conservazione: dopo l'esperimento, conservare in una soluzione di sodio azide allo 0,02% o in una soluzione di etanolo al 20%.